FITC又称为荧光素-5-异硫氰酸盐，与蛋白质交联的活性基团即为异硫氰酸酯基R-N=C=S，其反应式为：
以下摘自Greg. T. Hermanson 主编的《Bioconjugate Techniques(2nd Edition)》：
作为有机反应的分子机理和反应条件都讲得很清楚了，8以上的碱性环境主要是为了使蛋白中的所有氨基处于非质子化，也特别提出了降低反应pH到7可以使FITC仅与N端α-氨基反应而不与赖氨酸上的ε-氨基反应。
Thermo也有另一篇文章介绍了包含ITC在内的氨基反应探针的反应条件：
